一、準備室
準備室用于配制培養基和樣品處理等。室內設有試劑柜、存放器具或材料的專(zhuān)柜、實(shí)驗臺、電爐、冰箱和上下水道、電源等。準備室還要用于洗刷器皿等。室內應備有加熱器、蒸鍋,洗刷器皿用的盆、桶等,還應有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。
二、滅菌室
滅菌室主要用于培養基的滅菌和各種器具的滅菌,室內應備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設備及設施。
三、無(wú)菌室
無(wú)菌室也稱(chēng)接種室,是系統接種、純化菌種等無(wú)菌操作的專(zhuān)用實(shí)驗室。在微生物工作中,菌種的接種移植是一項主要操作,這項操作的特點(diǎn)就是要保證菌種純種,防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,很易造成污染,對接種工作干擾很大。
1. 無(wú)菌室的設置
無(wú)菌室應根據既經(jīng)濟又科學(xué)的原則來(lái)設置。其基本要求有以下幾點(diǎn):
(1)無(wú)菌室應有內、外兩間,內間是無(wú)菌室,外間是緩沖室。房間容積不宜過(guò)大,以便于空氣滅菌。最小內間面積2×2.5=5m2,外間面積1×2=2m2,高以2.5m以下為宜,都應有天花板。
(2)內間應當設拉門(mén),以減少空氣的波動(dòng),門(mén)應設在離工作臺最遠的位置上;外間的門(mén)最好也用拉門(mén),要設在距內間最遠的位置上。
(3)在分隔內間與外間的墻壁或“隔扇”上,應開(kāi)一個(gè)小窗,做接種過(guò)程中必要的內外傳遞物品的通道,以減少人員進(jìn)出內間的次數,降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm,內外都掛對拉的窗扇。
(4)無(wú)菌室容積小而嚴密,使用一段時(shí)間后,室內溫度很高,故應設置通氣窗。通氣窗應設在內室進(jìn)門(mén)處的頂棚上(即離工作臺最遠的位置),最好為雙層結構,外層為百葉窗,內層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內室使用后、滅菌前開(kāi)啟,以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。
2. 無(wú)菌室內設備和用具
(1)無(wú)菌室內的工作臺,不論是什么材質(zhì)、用途的,都要求表面光滑和臺面水平。
(2)在內室和外室各安裝一個(gè)紫外燈(多為30W)。內室的紫外線(xiàn)燈應安裝在經(jīng)常工作的座位正上方,離地面2m,外室的紫外線(xiàn)燈可安裝在外室中央。
(3)外室應有專(zhuān)用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來(lái)蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。
(4)內室應有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標簽紙、膠水、廢物筐等。
3. 無(wú)菌室的滅菌消毒
(1)薰蒸:這是無(wú)菌室徹底滅菌的措施。無(wú)菌室使用了較長(cháng)時(shí)間,污染比較嚴重時(shí),應進(jìn)行薰蒸滅菌?捎眉兹、乳酸或硫磺薰蒸。
(2)噴霧:在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微塵飛揚,并有殺菌作用?捎5%石炭酸噴霧。
(3)紫外線(xiàn)照射:在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。紫外線(xiàn)有較好的殺菌效果。通常應開(kāi)啟紫外線(xiàn)燈照射30~60min。
4. 無(wú)菌室工作規程
(1)無(wú)菌室滅菌。每次使用前開(kāi)啟紫外線(xiàn)燈照射30min以上,或在使用前30min,對內外室用5%石炭酸噴霧。
(2)用肥皂洗手后,把所需器材搬入外室;在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋,戴好口罩,然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。
(3)將各種需用物品搬進(jìn)內室清點(diǎn)、就位,用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧,返回外室,5~10min后再進(jìn)內室工作。
(4)接種操作前,用70%酒精棉球擦手;進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí),動(dòng)作要輕 緩,盡量減少空氣波動(dòng)和地面揚塵。
(5)工作中應注意安全。如遇棉塞著(zhù)火,用手緊握或用濕布包裹熄滅,切勿用嘴吹,以免擴大燃燒;如遇有菌培養物灑落或打碎有菌容器時(shí),應用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面,用酒精棉球擦手后再繼續操作。
(6)工作結束,立即將臺面收拾干凈,將不應在無(wú)菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無(wú)菌室后,對無(wú)菌室用5%石炭酸噴霧,或開(kāi)紫外線(xiàn)燈照射30min。